对疑似新型冠状病毒感染的病例进行快速、准确诊断对于及时收治并隔离患者、制止病毒蔓延非常重要。根据国家卫健委发布的《新冠肺炎诊疗方案（试行第五版）》，实时荧光RT-PCR检测被列为确诊病例的两种方法之一，而且由于时间短、成本低等特点，已成为应用最广的确诊新型冠状病毒的方法。疫情爆发后，上海市各医院检验科、疾控中心、核酸检测生物技术公司的PCR仪的校准需求暴增。

上海捷诺生物科技有限公司作为我国第一批拿到“新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒（荧光PCR法）”医疗器械注册证的公司，日前紧急委托我院生物计量科技创新团队，对其PCR仪提供现场校准服务，以确保设备性能良好、检测结果准确可靠。

我院生物计量科技创新团队为企业提供PCR仪现场校准服务

冠状病毒病毒结构的示意图，上面的尖刺形成了一个像日冕一样的“冠”，因此得名。

摘自AmericanSocietyfor Microbiology:

https://asm.org/Articles/2020/January/2019-Novel-Coronavirus-2019-nCoV-Update-Uncoating

实时荧光RT-PCR检测是什么？

新型冠状病毒的遗传信息都“写”在它的RNA（核糖核酸，存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体）上，与稳定的双螺旋DNA（脱氧核糖核酸，是生物细胞内含有的四种生物大分子之一核酸的一种）不同，单链RNA分子非常灵活多变，使得病毒获得了更高的变异性。2003年的SARS冠状病毒就是一个例子。所以说到底，我们的目标就是准确地检测到病毒的RNA。

真正采集到的RNA可能很少难以检测，那怎么才能准确检测到病毒RNA呢？

实时荧光RT-PCR仪（即“实时荧光逆转录聚合酶链式反应仪”）与冠状病毒检测试剂盒配合使用可以用于确定病毒RNA。首先把RNA变成DNA，然后再进行PCR扩增，把核酸扩增几百万倍，这时，再进行检测就变得容易多了。这个方法由于时间短、成本低等特点，已成为应用最广的确诊新型冠状病毒的方法。

然而实际检测可不那么容易，用于进行RT-PCR检测的PCR仪和检测试剂盒都会对最终结果造成影响，造成假阴性漏检现象。因此必须对PCR仪进行计量校准确保检测结果量值溯源。

按照JJF 1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》的要求，可采用合适的核酸标准物质对PCR仪的样本示值误差、样本线性等定量指标进行校准；采用多通道温度计，对PCR仪的温度示值误差、温度均匀度、平均升降温速率等温度指标进行校准。

那么，校准PCR仪时应注意些什么呢？

1、温度探头贴合性的影响

测温探头的外型应贴合PCR反应孔，尺寸误差小于1 mm。PCR仪厂家和型号众多，虽然反应孔的大小有行业的统一规定，但反应孔的高低有0.1 mL和0.2 mL两种不同的型号，不同的仪器有不同的样品仓打开方式，都会对测温探头的贴合性提出新的挑战。

2、PCR反应体系配制的影响

PCR仪以96孔的居多，有条件尽量使用排枪加样，减少单孔加样的误操作；反应体系中DNA的体积占总体积的20%最佳，既避免DNA干扰物对实验的抑制作用，又避免DNA溶液加样量过少带来的误差。如果操作不熟练的校准员，建议使用配制好并经计量验证的PCR校准反应板。

3、标准物质系列稀释操作的影响

应严格按照规范要求，用经过计量检定合格的电子天平进行称量和稀释，而不应该直接采用移液器进行稀释，否则会大大增加核酸定量结果的不确定度。

4、核酸反应试剂耗材的配套性影响

不同的PCR仪之间耗材配套性不一定兼容，除了容积差别外，反应盖帽形状也有差异。例如：罗氏公司与ABI公司的反应管不同，部分国产公司的PCR仪盖帽有明显的弧度，不配套的反应管盖帽可能会被105℃高温的PCR仪热盖融化。

为了使荧光定量PCR仪校准工作更高效、更规范，需要了解每个检测环节中可能带来的误差及其影响因素，避免不必要的工作失误，使校准结果更加准确可靠。

我院是全国最早开展PCR仪计量校准并取得社会公用计量标准证书的单位之一。

我院取得的社会公用计量标准证书

为了实现PCR仪计量校准，确保病毒核酸检测结果量值溯源和准确可靠，我院生物计量科技创新团队开展了一系列的技术积累。

一是研发DNA标准物质，对PCR仪进行示值误差校准确认

基于多年的技术积淀，我院研发了高纯度核酸标准物质研制技术，获批国家一级和二级标准物质三十余项，相对扩展不确定度小于5%。DNA标准物质就像核酸检测过程中的“砝码”，可用于一系列核酸定量分析过程的量值溯源。将标准物质经系列稀释后可配制成浓度范围为（10²~10¹⁰）copies/μL的样品，作为DNA模板配制PCR反应体系，制备PCR仪校准板，可以对PCR仪的样本示值误差、样本线性等定量指标进行校准。

我院研制的DNA国家标准物质

二是研发多通道PCR温度计为PCR仪“测温体检“

PCR仪的温度准确性对核酸检测非常重要，温度不均匀性会造成“假阴性”结果的出现。多通道PCR温度计由15个精密温度传感器、数据采集分析模块组成。可实现静态温度测定、动态温度跟踪和多通路检测， 对PCR仪的温度示值误差、温度均匀度、平均升降温速率等温度指标进行校准。

我院将通过高效快速优质的检定校准，让病毒PCR检测更加精准、数据更加可靠，为打赢疫情防控阻击战作出计量人的贡献。